Как оценивают качество сперматозоидов на молекулярном уровне

Как оценивают качество сперматозоидов на молекулярном уровне
  • Врачи
  • Лечение
  • Диагностика
  • Статья обновлена: 18 июня 2020

Приблизительно 15% супружеских пар в России бездетны, причем в половине случаев причиной бесплодия являются нарушения фертильности у мужчин. Применяемые в настоящее время диагностические методики далеко не всегда позволяют установить, чем именно обусловлена неспособность сперматозоидов к оплодотворению яйцеклетки, чтобы выбрать оптимальную тактику лечения. Новая технология, доступная большинству профильных медицинских учреждений, позволит решить эту проблему в масштабах страны.

Под микроскопом

Стандартные методики определения качества спермы включают подсчет количества сперматозоидов в 1 мл эякулята, оценку их морфологии и подвижности. Макро- и микроспкопическое исследование семенной жидкости позволяет оценить видимые патологии — повышенное содержание клеток крови (лейкоцитов и эритроцитов), указывающее на воспалительные и инфекционные заболевания половых путей, недостаточное количество или полное отсутствие сперматозоидов, снижение процента подвижных сперматозоидов.

Однако данные способы диагностики неспособны выявить причины наблюдаемых патологических изменений в сперме. Именно по этой причине во многих случаях пациентам андрологических клиник ставится диагноз «идиопатическое бесплодие» (т.е. бесплодие с неустановленными причинами).

На молекулярном уровне

Повысить информативность лабораторных исследований могут методики, основанные на современных методах генетического и молекулярно-биологического анализа. Наиболее перспективная цель подобных разработок — количественная оценка зрелости хроматина в сперматозоидах. Хроматин — вещество хромосом, представляющее собой комплекс ДНК, РНК и белков. Процесс дифференцировки сперматозоидов сопровождается кардиальным ремоделированием структуры хроматина, целью которого является его максимально плотная упаковка, что должно исключить активность генов и одновременно повысить степень защиты ДНК в течение процесса оплодотворения.

Большой объем экспериментальных данных свидетельствует о прямой зависимости между зрелостью (плотностью упаковки) хроматина сперматозоидов и их способностью к оплодотворению яйцеклетки. В свою очередь, нарушения процесса ремоделирования хроматина связаны с морфологическими и функциональными аномалиями, которые делают невозможным оплодотворение и нормальное развитие беременности.

Используемые в настоящее время методики оценки состояния генетического материала сперматозоидов либо несовершенны, либо слишком дорогостоящи. В частности, широко распространенный TUNEL-тест дает возможность оценить количество разрывов в ДНК половых клеток, однако эти данные не коррелируют с патологией, обусловленной неполной или аномальной упаковкой хроматина. Электронная микроскопия, также применяемая для оценки состояния хроматина сперматозоидов, ограничена высокой стоимостью, трудоемкостью и длительностью (до 2 недель) пробоподготовки, требует наличия высокотехнологичного оборудования, и, кроме того, не дает возможности дать точную количественную оценку доли сперматозоидов с аномальной компактизацией ДНК.

Новое решение

Принципиально новая методика оценки зрелости хроматина сперматозоидов, разработанная российскими исследователями, основана на применении микрококковой нуклеазы — фермента, вызывающего гидролиз незрелого хроматина. Исследования, проведенные в НИИ ФХБ им. А.Н. Белозерского МГУ совместно с ООО «Сфера» показали, что доступность хроматина сперматозоидов микрококковой нукалеазе, во-первых, может быть определена строго количественно, и, во-вторых, этот показатель отражает аномалии в дифференцировке сперматозоидов, ведущие к бесплодию.

Благодаря поддержке Фонда содействия развития малых форм предприятий в научно-технической сфере в 2016 году на рынок выйдет первый отечественный тест для диагностики мужской инфертильности — Набор реагентов для определения аномалии упаковки хроматина сперматозоидов человека с использованием микрококковой нуклеазы «TAPS».

Новый метод количественно определяет соотношение нормальных и аномальных сперматозоидов в эякуляте, выявляет нарушения дифференцировки, имеющие общий, системный характер и позволяет прогнозировать эффективность различных методов лечения мужского бесплодия.

Набор реагентов «TAPS»:

  • может использоваться в андрологических клиниках и центрах репродукции, не располагающих уникальным оборудованием типа проточного цитофотометра, электронного микроскопа, ультрамикротома и т.п. приборами, требующими для обслуживания специально подготовленного персонала;
  • работает в режиме экспресс-анализа (около 2 часов) за счет упрощенной пробоподготовки образцов спермы по сравнению с методом электронной микроскопии (2 недели), что существенно сокращает время диагностики;
  • одновременно позволяет анализировать от 10 до 20 образцов спермы;
  • обладает прогностическим эффектом для выбора стратегии лечения специфической патологии, связанной с незавершенной дифференцировкой сперматозоидов;
  • позволяет получить принципиально новую по сравнению с известными рутинными методами диагностики информацию о системной патологии сперматозоидов пациента;
  • обладает функциями контроля за работой тест-системы в условиях длительного хранения на доступных клеточных моделях.

Набор реагентов «TAPS» может использоваться в центрах репродукции человека как для увеличения частоты наступления беременности, так и при установлении причины бесплодия в программах экстракорпорального оплодотворения и гомологичной инсеминации.

Источники

  • Grandhaye J., Partyka A., Ligocka Z., Dudek A., Niżański W., Jeanpierre E., Estienne A., Froment P. Metformin Improves Quality of Post-Thaw Canine Semen. // Animals (Basel) - 2020 - Vol10 - N2 - p.; PMID:32059492
  • Mytilinaiou I., Sarganaki K., Sachouli E., Tsagdi S., Vardaki K., Vassiliadis A., Athanassakis I. Immune molecules in the female reproductive path and sperm: relevance to mate choice. // Reproduction - 2019 - Vol158 - N2 - p.159-167; PMID:31137007
  • Westfalewicz B., Dietrich M., Słowińska M., Judycka S., Ciereszko A. Seasonal changes in the proteome of cryopreserved bull semen supernatant. // Theriogenology - 2019 - Vol126 - NNULL - p.295-302; PMID:30599420
  • Li ZM., Liu N., Jiang YP., Yang JM., Zheng J., Sun M., Li YX., Sun T., Wu J., Yu JQ. Vitexin alleviates streptozotocin-induced sexual dysfunction and fertility impairments in male mice via modulating the hypothalamus-pituitary-gonadal axis. // Chem Biol Interact - 2019 - Vol297 - NNULL - p.119-129; PMID:30365938
  • Li P., Guo W., Yue H., Li C., Du H., Qiao X., Liu Z., Zhou Q., Wei Q. Variability in the protein profiles in spermatozoa of two sturgeon species. // PLoS One - 2017 - Vol12 - N10 - p.e0186003; PMID:29077704
  • Zhou DD., Hao JL., Guo KM., Lu CW., Liu XD. Sperm quality and DNA damage in men from Jilin Province, China, who are occupationally exposed to ionizing radiation. // Genet Mol Res - 2016 - Vol15 - N1 - p.; PMID:27050976
  • Liu FJ., Liu X., Han JL., Wang YW., Jin SH., Liu XX., Liu J., Wang WT., Wang WJ. Aged men share the sperm protein PATE1 defect with young asthenozoospermia patients. // Hum Reprod - 2015 - Vol30 - N4 - p.861-9; PMID:25637620
  • Paradowska-Dogan A., Fernandez A., Bergmann M., Kretzer K., Mallidis C., Vieweg M., Waliszewski P., Zitzmann M., Weidner W., Steger K., Kliesch S. Protamine mRNA ratio in stallion spermatozoa correlates with mare fecundity. // Andrology - 2014 - Vol2 - N4 - p.521-30; PMID:24711287
Дипломы и сертификаты